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 Home > 참여마당 > ▣ 캡스톤디자인 답변 > 1-2세부:박영우(신한승,이재영)

 제목 | 1-2세부:박영우(신한승,이재영)
 작성자 | Admin 작성일  | 2017/05/25 2:16 pm

질문1) 1-2세부: 박영우 (과제책임자: 신한승) - 정승원(1-1 세부)

질문1) NAD+Synthetase 효소와 NH4OH의 반응기작이 어떻게 되어 색변화가 일어나는 지?...

답변) NAD+Synthetase 효소는 NH3(암모니아 기체)를 기질로 NaAD에서 NAD+를 합성하는 효소입니다.
이때, 산물로 나오는 NAD+를 알콜탈수소효소(alcohol dehydrogenase)를 이용하여 NADH로 환원시키면,
이와 반응하여 MTS(tetrazolium salt)는 노랑색에서 붉은 갈색으로 색변화를 나타냅니다.
이로써 발생하는 암모니아 기체의 농도에 따라 색변화를 볼수 있습니다.

질문2) 1-2세부: 박영우 (과제책임자: 신한승) - 장한동(1-1 세부)

질문2-1) 효소 반응 온도

답변) 실험 온도는 상온(23도, 298K)에서 이루어졌습니다.
앞으로 다양한 온도에서 실험을 실시할 계획입니다.

질문2-2) 5mM NH4OH에서 발생하는 실험값과 예상값의 차이
예상값은 수산화암모늄 용액이 완전히 증발한다는 가정하게 계산된 값이며,
실제로 용액에서 기체로 증발한 측정된 값은 이보다 낮게 측정된다고 봅니다.
물론 사용한 암모니아 센서의 정확도나 실험의 오차가 반영되어 있을 수는 있습니다.
반복 실험을 통해 용액의 농도에 따른 정밀도는 유지하였습니다.
 

질문3) 1-2세부: 박영우 (과제책임자: 신한승) - 원기훈(2-2세부)

질문 3-1) 사용한 NAD+ synthetase 효소는 물에 용해된 암모니아 기체(NH3)와 반응하나요? 아니면 이온화된 암모늄 이온(NH4+)과 반응하나요?

답변) 암모니아 발생원(용액이나 식품군)에서 암모니아 기체형태로 날라오면 지시계내의 효소와 반응하게 됩니다.
물론 지시계 내에서는 암모니아 기체가 암모늄이온으로 바뀐다고 봐도 될것 같습니다.

질문 3-2) c) 과정(발색 반응)에서 NADH가 산화되어 NAD+ 되지는 않나요?

답변) 네, NADH가 다시 산화되어 MTS 발색제를 환원시키면서 색이 변하게 됩니다.
노랑색(산화된 MTS) --> 붉은 갈색 (환원된 MTS)

 제목 | Re: 1-2세부:박영우(신한승,이재영) - 원기훈(2-2세부)
 작성자 | Admin 작성일  | 2017/05/25 5:27 pm
질문 3-2) c) 과정(발색 반응)에서 NADH가 산화되어 NAD+ 되지는 않나요?
<!--[if !supportEmptyParas]--> <!--[endif]-->
답변) , NADH가 다시 산화되어 MTS 발색제를 환원시키면서 색이 변하게 됩니다.
노랑색(산화된 MTS) --> 붉은 갈색 (환원된 MTS)
---------------------------------------------------------------------------------------------------
NADH의 발색 반응시 NAD가 다시 생성되면 암모니아 분석에 오류를 일으킬 수 있습니다.
왜냐하면 생성된 NAD가 alcohol dehydrogenase와 ethanol에 의해 다시 NADH가 생성되기 때문입니다. 즉, 암모니아가 없어도 NAD가 생겨나게 됩니다.
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